Diabetologia：激活但功能受損的記憶Tregs在1型糖尿病患者進展減慢的過程中逐漸擴展

從第一次經常成現肝細胞自身病原體到經常成現1HG冠心病病人腹瀉的令人滿意率在學齡前時期就有很好的說明了，多個肝細胞自身病原體非典HG的學齡前之成處70%在血清切換后10年內入院冠心病，而隨訪15年的學齡前這一人口比例增高到84%。相比之下，占病人1HG冠心病一半以上的HG1HG冠心病的得病機制還從未得到充分的分析。

越來越多的人開始用作分段系統來定義1HG冠心病的令人滿意：生物體在經常成現多種肝細胞自身病原體時進入第1期中，經常成現高血壓誘發時進入第2期中，經常成現腹瀉時進入第3期中。一些多發肝細胞自身病原體非典HG的生物體，在1期和2期，令人滿意速度慢，并轉變為得病的1HG冠心病。我們之前說明了了一個大在首次樣品到多種肝細胞自身病原體檢驗后多于10年無冠心病的變慢令人滿意者，這兩組病患數目少，但不同之處極為指明。隨后，我們發現肝細胞自身抗原特異性CD8+T細胞內質反應在令人滿意比速度慢的病患之中基本上不長期存在，但在格外進一步得病和曾一度長期存在的冠心病病患之中很容易樣品到。這可能表明，與令人滿意病患相比，這些病患致病反應的恒定增強。

早期分析表明，盡管恒定性T細胞內質(Treg)比例短時間，但冠心病病患長期存在一些功能局限性，其之中包含對IL-2的反應戰斗能力減緩。此外，冠心病病患之中的物理現象CD4+T細胞內質可能對恒定兼具抵抗性，表現為物理現象T細胞內質的誘發移向，自然產生的Treg和腎臟產生的誘導Treg，以及抗原經歷的CD4+T細胞內質之中IL-2反應移向。本分析的旨在是說明了了CD4+恒定性T細胞內質(Treg)在群集極比速度慢令人滿意者之中的不同之處，他們的平均成年為43歲(31-72歲)，隨訪短時間為18-32年。

方法：BOX分析是一項以人群基礎上的縱向分析，在21歲此表確診的病患配偶之中檢查和1HG冠心病的危險因素。我們之前說明了了曾一度比速度慢令人滿意者的不同之處，他們保證多重肝細胞自身病原體非典HG超過10年，但從未經常成現冠心病的病人腹瀉，慢性或非受累致病。隨后，10名之前保證無冠心病并愿意提供大量血液檢驗的比速度慢令人滿意者歸屬于T和B細胞內質功能數據分析。在目前的分析之中，8名慢令人滿意者(SP兩組)，之中位成年43歲(31-72歲)，18 - 32歲彼此間的肝細胞自身病原體非典HG。所有的組織者都處于1HG冠心病令人滿意的1期，盡管一些人隨后失去了肝細胞自身病原體對某些抗原的非典HG反應，然而，一名病患仍然處于2期多于6年，但從未經常成現病人腹瀉，一名病患被病人為冠心病，該實驗者72歲，在采集實驗檢驗時，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在數據數據分析之中對該NAD同步進行了單獨分析。分離成來外周血單個氘細胞內質(PBMCs)，采用多變量流式細胞內質法術和T細胞內質誘發試驗分析NAD之中Treg的高頻率、表現HG和功能。用作FlowSOM和CITRUS(聚類鑒別、表征和回歸)同步進行無行政官員聚類數據分析，分析Treg表現HG。

結果：與肥胖癥NAD相比，來自慢令人滿意體的清醒CD4+T細胞內質的行政官員聚類說明了，激能活的清醒CD4+ Treg高頻率增高，與利尿劑誘導的TNFR相關細胞內(GITR)暗示增高有關。一名HbA1c升高的病患與令人滿意比速度慢者和切換的對照兩組相比，Treg譜并不相同。功能數據分析表明，與肥胖癥NAD相比，來自比速度慢令人滿意體的Treg誘導的CD4+物理現象T細胞內質誘發明顯受損。表現為對物理現象CD4+T細胞內質CD25和CD134暗示的誘發增高。

圖1 險惡的表現HG數據分析說明了，CD4+Treg亞HG在慢令人滿意隊列之中增高。由FlowSOM分解成的Treg室，聚集地在來自所有NAD的能活CD4+CD45RA -細胞內質上。根據上面物暗示鑒別成10個元簇:清醒T細胞內質_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T細胞內質;HLA-DR + GITR +清醒T細胞內質;磁盤Treg_1;磁盤Treg_2;磁盤Treg_3;和磁盤Treg_4。(a)用作9個不同Treg上面分解成的10個元簇的MST。每個鏈表值得一提的是一個一個大(100個一個大)，格外大的元一個大(10個元一個大)在鏈表兩組周邊上色。每個鏈表之中的餅圖對此單個上面的暗示級別。(b)每個元聚類的熱圖，以說明了全面性上面暗示。(c, d)為HD兩組(c)和SP兩組(d)分解成圖，以及FlowSOM辨別的每個元簇的覆蓋層。(e-l)相比豐度為每個metacluster木箱該圖表(豐度> 0.05%)未確定為HD和SP兩組:磁盤Treg_2 (e),磁盤Treg_3 (f),磁盤Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T細胞內質(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T細胞內質(l)。黃色左上方值得一提的是捐獻者SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配對符號秩檢驗。此鍵適用于圖形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

圖2 用作CITRUS的預測模HG聲稱，Treg高頻率的增高是令人滿意比速度慢的徽章。分級制度誘導(a - f)和柑橘數據分析(g-k)來得SP組織者和切換的HD組織者在CD4+CD45RA?T細胞內質上的差異。(a)親本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l族群的值得一提的是性圖。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通過HLA-DR和GITR暗示同步進行分離成來，三維FlowSOM族群。(b) HD(環紋)和SP(藍點)兩組以及NADSP 606(黃色)之中CD25+ cd127的高頻率綜合圖。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+誘導開集的木箱該圖表;(c) HLA-DRloGITR?(磁盤Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(磁盤Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(磁盤Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+磁盤T cell)。(g - i)甜菜簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3暗示強度著色，箭頭突成的簇被辨別為SP和HD隊列彼此間的不同。(j)木箱該圖表說明了了在SP(藍點)和HD(灰點)兩組之中，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的相比豐度(人口比例)。(k)加權說明了每個簇的表現HG(深紫色)和Treg上面相比暗示與故事情節暗示(紫色);上列，磁盤Treg_3;下面悄悄，磁盤Treg_4。故事情節與所有其他簇之中上面的暗示有關。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配對符號秩檢驗

圖3 與肥胖癥獻血者相比，令人滿意比速度慢者清醒treg的GITR增高。每個清醒CD4+T細胞內質元簇(清醒T細胞內質_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T細胞內質;HLA-DR + GITR +清醒T細胞內質;磁盤Treg_2;磁盤Treg_3;來自FlowSOM的memory Treg_4)樣品每個暗示上面的變異。(a,b)來自HD (a)和S (b)隊列的暗示熱圖(sp606不包含在內)。(c,d)清醒Treg_4元簇之中所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(黃色)的FlowSOM GITR暗示串聯，說明了加權(c)和綜合圖(d)。Wilcoxon配對符號秩和檢驗，p< 0.07(黃色)所有NAD包含，p< 0.05(紫色)NADSP 606和切換的HD不包含在測試之中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之中GITR暗示，從分級制度誘導，從所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(黃色)串聯，說明了加權(e)和綜合圖(f) *p< 0.05, Wilcoxon配對符號秩檢驗

圖4 來自比速度慢令人滿意的CD4+ treg細胞內質掌控物理現象CD4+T細胞內質的戰斗能力減緩。SP兩組用紫色的該線和左上方對此，HD兩組用灰色的該線和左上方對此，黃色的該線/左上方對此NADsp606。用作CD4+CD25+ Treg分選試劑盒對CD4+T細胞內質同步進行分選。CD4+CD25?(這樣的話者)被上面為CFSE, Treg按觀察的人口比例氫氧化鈉。用抗CD3 /28微珠再造細胞內質，培育3同一天同步進行流式細胞內質法術樣品。(a-d)與CD4+這樣的話者相比應的treg培育(自體)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg與HD這樣的話者培育。(a,b,f) CFSE游離(a,e)和CFSE誘發倍數(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的誘發倍數。用作非典HG對照(激能活的響應細胞內質內含treg)計算誘發倍數。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重復測量雙向方差數據分析。?p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重來得測試

圖5 物理現象CD4+T細胞內質對比速度慢令人滿意的T細胞內質再造的誘發格外引人注意。SP兩組用紫色的該線和左上方對此，HD兩組用灰色的該線和左上方對此，黃色的該線/左上方對此NADsp606。用作CD4+CD25+Treg分選試劑盒對CD4+T細胞內質同步進行分選。CD4+CD25?(這樣的話者)被cfsel上面，treg按觀察的人口比例氫氧化鈉。用抗CD3 /28微珠再造細胞內質，培育3同一天同步進行流式細胞內質法術(CD25反染)和細胞內質因子數據分析。HD Treg與HD、SP或sp606這樣的話者共同培育。(a,b) CFSE游離(a)和CFSE誘發花紅(b)。(c,d) CD25誘發花紅(c)和CD134誘發花紅(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育之中的暗示。***p< 0.001， **p< 0.01，重復測量雙向方差數據分析。?p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重來得測試

推論：我們算成的推論是，來自比速度慢令人滿意子的再造清醒CD4+Treg在GITR暗示之中得到了擴展和多樣，忽視了進一步分析Treg在1HG冠心病不確定性生物體之中的舉例來說的必要性。

原文成處：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28